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摘要
乳蛋白水解物已经应用于婴幼儿配方粉的生产，但是一些水解物由于作用表位水解不彻底，依然存在致敏性。本研究旨在探索特异性水解αs1-酪蛋白作用表位的蛋白酶筛选的方法。首先通过固相合成法合成αs1-酪蛋白作用表位aa83-105，纯化鉴定后，偶联牛血清白蛋白（Bovine Serum Albumin，BSA）制备完全抗原，然后免疫Balb/c小鼠，制备单克隆抗体，进而建立间接竞争酶联免疫吸附测定方法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA），以αs1-酪蛋白制备的单抗及建立的方法为对照。结果表明：合成作用表位的纯度在90%以上，与BSA偶联率为6.31。单抗的亚型为IgG1，效价可达到1:320000，可以与αs1-酪蛋白发生特异性免疫反应，与大豆蛋白无交叉反应。建立的间接竞争ELISA方法，竞争抑制曲线线性回归方程为y=-9.22x+100.78(R2=0.9806)，方法重复性、精确性均较好，检出限低于αs1-酪蛋白单抗建立的方法，初步筛选到木瓜蛋白酶和Alcalase碱性蛋白酶水解液的抗原残留量较小，需要进一步通过体内试验验证结果。αs1-酪蛋白作用表位aa83-105 G1型单克隆抗体制备成功，为新型αs1-酪蛋白作用表位aa83-105低致敏配方粉的开发，提供了ELISA检测高灵敏专用单克隆工具抗体。
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