人骨髓内皮祖细胞的分离、诱导培养和扩增

作者：柳瑞军; 钟竑; 单根法; 许勤; 熊健

来源：中国胸心血管外科临床杂志, 2008, (02): 113-117.

• 内皮祖细胞
• 骨髓
• 细胞培养

目的探讨并改进从人骨髓中分离、诱导培养和体外扩增内皮祖细胞(EPCs)的方法,为EPCs参与基础研究和临床应用奠定基础。方法采用不同的细胞分离液,用密度梯度离心法从正常人骨髓中分离单个核细胞(hBMMNCs),分别培养在包被人纤维连接蛋白(HFN包被组),包被明胶(明胶包被组)和未包被(未包被组)的培养皿内,利用EBM-2培养4~7d后出现细胞克隆集落(cellcolony-forming units,CFUs),挑选内皮祖细胞样CFUs继续培养(CFUs挑选法),采用流式细胞仪检测CD34+KDR+和CD133+KDR+双荧光阳性细胞,细胞免疫化学法检测EPCs表面标记CD133、CD34、CD31、vWF和KDR的表达。结果用OptiprepTM分离液可从人骨髓中更有效地分离出hBMMNCs,进而诱导获取更多EPCs并可进行体外培养扩增;流式细胞仪检测结果显示CD133+KDR+细胞高达70.4%±5.4%,CD34+KDR+细胞高达69.1%±8.7%;HFN包被组和明胶包被组细胞生长一样旺盛,均可促进EPCs的贴壁生长,促进其生长的作用差异无统计学意义(P>0.05),而未包被组细胞生长数量最少。培养7d的贴壁细胞表面标记CD133、CD31、vWF和KDR均呈阳性,培养14d的贴壁细胞表面标记CD34呈阳性。结论CFUs挑选法可以从人骨髓中成功地获取更多EPCs并在体外扩增,提出了另一种获取EPCs的高效简单方法,进一步拓宽了获取EPCs的方法和范围。

• 单位
  上海交通大学医学院附属新华医院