干扰素-α转染HepG2细胞内下调表达基因的筛选

作者：张修礼; 曲建慧; 徐东平; 钟彦伟; 刘妍; 孙自勤; 李兆申

来源：解放军医学杂志, 2007, (01): 35-38.

• 干扰素-α
• 细胞系,肿瘤
• 抑制性消减杂交技术

目的筛选干扰素-α真核表达质粒转染HepG2细胞后细胞内表达下调的基因,以进一步探讨干扰素-α作用的分子生物学机制。方法将pcDNA3.1(-)-IFN-α以及pcDNA3.1(-)空载体分别转染肝母细胞瘤HepG2细胞系,用抑制性消减杂交技术筛选pcDNA3.1(-)-IFN-α转染HepG2细胞内表达下调的基因。以pcDNA3.1(-)转染组细胞作为tester,pcDNA3.1(-)-IFN-α转染组作为driver,建立消减文库,随机挑选阳性克隆,测序并进行序列比对,得到下调表达的基因。应用RT-PCR技术,进一步证明IFN-α对Hsp90的下调表达作用关系。结果成功构建了IFN-α真核表达质粒转染HepG2细胞后表达下调的cDNA消减文库。从文库中随机挑选克隆,测序并进行生物信息学分析后,得到下调表达的基因有铁蛋白,热休克蛋白90,S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶1,真核翻译延伸因子1β,信号序列受体β(SSR2),组织因子路径抑制子,RAD23同源物B。RT-PCR进一步表明,IFN-α真核表达质粒转染的HepG2细胞内Hsp90mRNA表达水平下调。结论应用SSH技术成功构建了pcDNA3.1(-)-IFN-α转染的HepG2细胞内表达下调的cDNA消减文库,并筛选出下调表达基因,半定量RT-PCR表明IFN-α对Hsp90mRNA具有下调表达作用。为进一步阐明IFN-α作用的分子生物学机制提供了重要的理论依据。

• 单位
  长海医院消化内科; 中国人民解放军第二军医大学; 解放军第302医院