狂犬病病毒微滴式数字PCR检测方法的建立

作者：李鑫; 鞠厚斌; 葛菲菲; 杨德全; 沈海潇; 王建; 赵洪进^*

来源：中国兽医杂志, 2023, 59(03): 41-45.

• 狂犬病
• 微滴式数字PCR
• 检测方法

为了建立可绝对定量狂犬病病毒(RABV)的微滴式数字PCR(ddPCR)检测方法，本试验根据RABV基因组起始区域设计引物和探针，继而优化引物和探针浓度以及退火温度，并对建立的ddPCR方法的灵敏度、特异性和重复性进行分析。结果显示：ddPCR方法的最佳引物和探针浓度分别为900 nmol/L和250 nmol/L,最佳退火温度为55℃;ddPCR方法的标准曲线相关系数(R2)为0.999,呈现良好的线性关系；灵敏度高，最低可检测到3.37 copies/μL;特异性良好，与常见犬病原无交叉反应；重复性好，检测结果稳定。临床样品的检测结果显示，本试验建立的狂犬病病毒ddPCR方法与实时荧光定量反转录PCR(RT-PCR)方法的符合率为100%。结果表明，本试验建立的狂犬病病毒微滴式数字PCR方法灵敏度高、特异性强，可用于狂犬病病毒的绝对定量检测。

• 单位
  上海市动物疫病预防控制中心