慢病毒介导的GHSR1a shRNA对结直肠癌细胞生长的影响

作者：刘岸; 黄成钢; 徐佳

来源：中国病理生理杂志, 2016, 32(07): 1227-1234.

• 结直肠癌
• Ghrelin
• 生长激素促泌素受体1a
• PTEN

目的:构建生长激素促泌素受体1a(growth hormone secretagogue receptor 1a,GHSR1a)基因短发夹干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体,感染人结直肠癌细胞系SW480,观察沉默GHSR1a基因对SW480细胞生长的影响,并探讨其作用机制。方法:构建特异性靶向GHSR1a基因的shRNA慢病毒表达载体和阴性对照序列慢病毒载体;建立稳定表达GHSR1a shRNA的SW480细胞、阴性对照细胞(NC)及空白对照细胞(BC),RTPCR检测GHSR1a的mRNA在细胞中的表达;通过Western blot技术检测细胞中GHSR1a、ghrelin、PTEN、p-AKT及p53蛋白的水平;CCK-8法测定GHSR1a shRNA对SW480细胞活力的影响;建立裸鼠结直肠癌皮下移植瘤模型,实验结束后处死裸鼠并测量各组裸鼠肿瘤重量;免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki-67和PTEN的阳性表达。结果:在体外实验中,GHSR1a在人结直肠癌细胞株Caco-2及SW480中的表达明显高于人正常结肠上皮细胞株NCM460的表达;成功建立了稳定表达GHSR1a shRNA的SW480细胞;GHSR1a shRNA能明显抑制SW480细胞GHSR1a mRNA及蛋白的表达;沉默GHSR1a基因后SW480细胞活力明显减弱;与NC组相比较,GHSR1a shRNA组细胞中PTEN mRNA及蛋白水平上调,AKT磷酸化被抑制,p53的表达明显增加;在体内实验中,与NC组相比较,GHSR1a shRNA组裸鼠结直肠癌皮下移植瘤重量明显减轻,同时Ki-67表达下调,PTEN表达上调。结论:慢病毒介导的GHSR1a shRNA对体内、外人结肠癌细胞的生长有明显抑制作用,该作用可能通过上调PTEN及其下游PI3K/AKT通路实现。

• 单位
  岳阳市第一人民医院