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摘要
目的 鉴定肠致病性大肠杆菌（EPEC）效应因子E2348C-1040泛素连接酶活性，检测其催化形成的泛素链的连接方式。方法 构建原核表达质粒，转化感受态细胞，表达纯化E2348C-1040蛋白质。通过体外泛素化实验鉴定其泛素连接酶活性，利用泛素赖氨酸位点突变蛋白结合Western印迹实验检测该分子催化形成的泛素链的连接位点。结果 成功构建原核表达质粒，获得纯度大于85%、浓度约为0.5 mg/ml的E2348C-1040蛋白质。分子水平的酶活实验结果表明E2348C-1040分子具有泛素连接酶活性，能催化形成不依赖于赖氨酸的泛素链。通过构建真核表达质粒转染HEK-293T细胞，发现E2348C-1040分子可在宿主细胞中催化形成甲硫氨酸（methionine 1,M1）连接的线性泛素链。结论 EPEC效应因子E2348C-1040具有泛素连接酶活性，能催化泛素形成M1连接的线性泛素链。这一发现将为揭示效应因子E2348C-1040在宿主细胞内的作用机制提供研究线索。
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单位病原微生物生物安全国家重点实验室
