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摘要
目的探讨肝脏X受体激动剂T0901317对肝细胞癌血管生成的作用及机制。方法采用实验研究方法。人肝癌细胞MHCC97-H、人肝癌细胞Huh7、人脐静脉内皮细胞HUVEC各自的空白组、低浓度组、高浓度组分别加入0、1、3μmol/LT0901317。采用CCK-8法检测各组细胞生长情况。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析各组细胞肝脏X受体靶基因脂肪酸合成酶(FAS)mRNA相对表达量。测量MHCC97-H裸鼠模型(MHCC97-H对照组和MHCC97-H T0901317组)皮下肿瘤体积和体质量。处死裸鼠后获取肿瘤组织。采用免疫组织化学染色检测裸鼠肿瘤组织中肿瘤血管生成标志物CD31相对表达量。采用Transwell法检测HUVEC各组细胞迁移能力和成血管能力。观察指标:(1)T0901317对MHCC97-H、Huh7、HUVEC生长的影响。(2)T0901317对MHCC97-H、Huh7、HUVEC肝脏X受体的作用。(3)T0901317对MHCC97-H裸鼠模型皮下肿瘤生长的影响。(4)T0901317对MHCC97-H裸鼠模型皮下肿瘤组织中CD31表达的影响。(5)T0901317对HUVEC迁移能力的影响。(6)T0901317对HUVEC成血管能力的影响。正态分布的计量资料以±s表示,多组间比较采用方差分析,两组间比较采用t检验。结果 (1)T0901317对MHCC97-H、Huh7、HUVEC生长的影响。CCK-8法细胞生长实验结果显示:MHCC97-H空白组、MHCC97-H低浓度组、MHCC97-H高浓度组活细胞百分比分别为100.0%±1.7%、101.0%±0.7%、104.6%±1.9%,3组比较,差异无统计学意义(F=2.632,P>0.05)。Huh7空白组、Huh7低浓度组、Huh7高浓度组活细胞百分比分别为100.0%±2.7%、97.6%±2.4%、103.7%±2.8%,3组比较,差异无统计学意义(F=1.404,P>0.05)。HUVEC空白组、HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组活细胞百分比分别为100.0%±0.7%、100.7%±1.2%、101.3%±0.8%,3组比较,差异无统计学意义(F=0.471,P>0.05)。(2)T0901317对MHCC97-H、Huh7、HUVEC肝脏X受体的作用。实时荧光定量PCR结果显示:MHCC97-H空白组、MHCC97-H低浓度组、MHCC97-H高浓度组细胞FAS mRNA相对表达量分别为100.0%±2.2%、658.5%±7.7%、1 241.0%±106.8%,3组比较,差异有统计学意义(F=46.227,P<0.05)。其中MHCC97-H空白组分别与MHCC97-H低浓度组、MHCC97-H高浓度组比较,差异均有统计学意义(t=70.025,8.274,P<0.05);MHCC97-H低浓度组与MHCC97-H高浓度组比较,差异有统计学意义(t=4.222,P<0.05)。Huh7空白组、Huh7低浓度组、Huh7高浓度组细胞FAS mRNA相对表达量分别为100.0%±15.8%、1 225.0%±26.7%、2 015.0%±215.1%,3组比较,差异有统计学意义(F=49.402,P<0.05)。其中Huh7空白组分别与Huh7低浓度组、Huh7高浓度组比较,差异均有统计学意义(t=39.460,8.879,P<0.05);Huh7低浓度组与Huh7高浓度组比较,差异有统计学意义(t=2.836,P<0.05)。HUVEC空白组、HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组细胞FAS mRNA相对表达量分别为100.0%±19.6%、790.8%±116.5%、1 756.0%±55.0%,3组比较,差异有统计学意义(F=185.395,P<0.05)。其中HUVEC空白组分别与HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组比较,差异均有统计学意义(t=7.639,34.375,P<0.05);HUVEC低浓度组与HUVEC高浓度组比较,差异有统计学意义(t=7.488,P<0.05)。(3)T0901317对MHCC97-H裸鼠模型皮下肿瘤生长的影响。MHCC97-H裸鼠模型皮下肿瘤生长实验结果显示:MHCC97-H对照组和MHCC97-H T0901317组裸鼠模型皮下肿瘤体积分别为(935±72)mm3和(552±47)mm3,两组比较,差异有统计学意义(t=4.449,P<0.05)。MHCC97-H对照组和MHCC97-H T0901317组裸鼠模型体质量分别为(23.8±0.8)g和(21.7±1.7)g,两组比较,差异无统计学意义(t=1.059,P>0.05)。(4)T0901317对MHCC97-H裸鼠模型皮下肿瘤组织中CD31表达的影响。免疫组织化学染色检测结果显示:MHCC97-H对照组和MHCC97-H T0901317组裸鼠模型皮下肿瘤组织中CD31相对表达量分别为100%±11%和35%±7%,两组比较,差异有统计学意义(t=4.919,P<0.05)。(5)T0901317对HUVEC迁移能力的影响。Transwell法细胞迁移实验结果显示:HUVEC空白组、HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组穿膜细胞百分比分别为100.0%±4.0%、57.3%±1.5%、32.7%±1.7%,3组比较,差异有统计学意义(F=163.944,P<0.05)。其中HUVEC空白组分别与HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组比较,差异均有统计学意义(t=9.998,15.434,P<0.05);HUVEC低浓度组与HUVEC高浓度组比较,差异有统计学意义(t=10.801,P<0.05)。(6)T0901317对HUVEC成血管能力的影响。细胞成血管实验结果显示:HUVEC空白组、HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组成血管长度相对值分别为100.0%±3.4%、68.4%±3.5%、44.7%±0.5%,3组比较,差异有统计学意义(F=38.964,P<0.05)。其中HUVEC空白组分别与HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组比较,差异均有统计学意义(t=6.268,9.831,P<0.05);HUVEC低浓度组与HUVEC高浓度组比较,差异有统计学意义(t=3.460,P<0.05)。结论肝脏X受体激动剂T0901317可抑制肝细胞癌血管生成。
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