摘要
目的:探讨胱硫醚β合成酶(CBS)在前列腺癌中的差异表达情况,及其对前列腺癌细胞增殖的调控作用。方法:利用GEPIA网站分析来源于TCGA和GTEx数据库的492例前列腺癌组织和152例正常组织中CBS mRNA表达情况。利用ULCAN网站分析来源于TCGA数据库的497例前列腺癌组织和52例正常组织中CBS mRNA的表达情况。用RPIM-1640培养基培养前列腺癌细胞系DU145、PC3、LNCaP和C4-2,免疫印迹实验检测CBS蛋白表达情况。shRNA转染DU145细胞,分为对照shRNA组、CBS shRNA#1组或#2组,克隆形成实验检测细胞克隆形成数量,BrdU标记实验检测细胞增殖能力,免疫印迹实验检测AKT、mTOR、S6K蛋白表达情况,以及AKT S473位点、mTOR S2448位点、S6K T421/S424位点的磷酸化水平。将稳定表达对照shRNA、CBS shRNA#1或#2的DU145细胞注射入小鼠皮下,建立小鼠前列腺癌移植瘤模型,观察肿瘤生长情况。结果:数据库分析结果显示,与正常前列腺组织比较,前列腺癌组织中CBS mRNA的表达水平显著上升。CBS蛋白在上述前列腺癌细胞系中均有表达,其中在DU145细胞中表达水平最高。与对照shRNA组相比,CBS shRNA#1组或#2组的克隆形成数量显著减少[(23±2.309)个vs (5.667±1.453)个,(6.333±1.856)个],BrdU标记信号强度显著下降(211.3±25.31 vs 90±10.6,113±15.39)。小鼠模型显示,与稳定表达对照shRNA的DU145细胞构建的移植瘤对比,表达CBS shRNA#1或#2的DU145移植瘤生长受到抑制,体积显著减小,第27天时体积分别为(840.4±37.48)mm3 vs (415.9±34.88)mm3,(297.6±25.74)mm3。shRNA转染的DU145细胞中,与对照shRNA对比,CBS shRNA#1组和#2组AKT、mTOR、S6K蛋白的表达水平无明显变化,AKT S473位点、mTOR S2448位点、S6K T421/S424位点的磷酸化水平显著下降。结论:CBS在前列腺癌中高表达,沉默CBS表达可抑制前列腺癌细胞增殖,以及抑制AKT、mTOR、S6K蛋白的活化。
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单位成都市新都区人民医院