人脐带间充质干细胞单次静脉注射NOG小鼠组织分布及其分析方法学研究

作者：叶志超; 陈国玉; 潘若浪; 史煜华; 顾利强; 夏丽娟; 林晓波; 张强; 徐莎莎; 邵金金^*; 张立将^*

来源：中国实验动物学报, 2023, 31(12): 1573-1580.

• 人脐带间充质干细胞
• NOG小鼠
• 定植分析
• 组织分布

目的 建立并验证小鼠组织中人源SRY基因DNA RT-qPCR分析方法学，研究人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, HUCMSCs)单次静脉注射后在重度免疫缺陷NOG小鼠体内的组织分布情况。方法 建立小鼠组织中人源SRY基因DNA的RT-qPCR分析方法，进行标准曲线与线性范围、准确度与精密度、稳定性等方法学验证。取NOG小鼠36只，雌雄各半，单次静脉注射给予HUCMSCs 3.5×107 cells/kg,于6、12、24、72 h、1周、2周各取6只小鼠麻醉，采集血液(EDTA抗凝)后解剖，取肺、肾、心脏、肝、大脑、脊髓、胃、小肠、脂肪、皮肤、脾、睾丸(子宫、卵巢)提取DNA,用已验证的小鼠组织中人源SRY基因DNA RT-qPCR分析方法测定各组织中HUCMSCs的分布情况。另选取NOG小鼠18只，雌雄各半，分为对照组6只、给药组12只，分别静脉注射0.9%氯化钠注射液、HUCMSCs 3.5×107 cells/kg,给药期间观察小鼠急性毒性反应情况，给药组于给药后72 h、2、4周各取4只动物剖检观察脏器组织大体观情况，取肺组织石蜡切片采用免疫组化法检测线粒体蛋白表达，分析HUCMSCs在肺组织中的定植情况。结果 建立的小鼠组织中人源SRY基因DNA的RT-qPCR分析方法各考察指标均符合验证标准；NOG小鼠单次静脉注射HUCMSCs后，主要分布于肺和血液中(给药后1周内),肺组织浓度高于血液，肺组织、血液中HUCMSCs浓度分别在6～24 h、6～72 h之内维持相对平稳水平，之后随时间推移下降，其他组织各采样点均未测得HUCMSCs分布；定植结果显示静脉注射HUCMSCs后72 h可在肺部检测到其存在，2周和4周时则未检测到；单次静脉注射HUCMSCs后NOG小鼠未见明显急性毒性反应。结论 建立的HUCMSCs小鼠组织中分布分析方法可靠、可行；NOG小鼠单次静脉注射HUCMSCs后主要于给药后1周内分布于肺和血液，72 h主要定植于肺组织；单次静脉注射HUCMSCs具有良好的安全性。

• 单位
  杭州医学院