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摘要
为明确海巴戟叶片中莨菪亭累积规律，及探究4CL基因在其累积过程中起到的作用。利用高效液相色谱仪对离体的海巴戟成熟叶0～48 h内莨菪亭含量进行测定，并测定不同浓度的阿魏酸处理后莨菪亭含量的变化。利用紫外分光光度计进行以阿魏酸为底物进行酶活反应的4CL总酶活性测定。对RNA-seq结果中7个4CL基因进行qPCR，筛选出一个表达趋势与莨菪亭含量及酶活变化趋势一致的4CL基因作为关键候选基因，进行全长克隆以及生物信息学分析，最后用qPCR研究其表达特性。海巴戟叶片在采摘后48 h内，莨菪亭含量在12 h时最高，达0.35 mg/g，48 h最低，为0.18 mg/g。4CL总酶活性变化与莨菪亭含量趋势相近。阿魏酸处理后的叶片中4CL总酶活增加。通过qPCR筛选到4CL（DN15707）基因，克隆、测序后发现其长度为1632 bp，具备完整开放阅读框，在NCBI进行序列比对及系统进化树分析，确定该基因为4CL基因家族中的4CL2基因，命名为Mc4CL2。Mc4CL2基因可能是莨菪亭累积过程中的关键基因，它能启动4CL酶活，充分利用阿魏酸底物进而导致莨菪亭累积。
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