DNA拓扑异构酶Ⅱβ结合蛋白1(TopBP1)磷酸化功能位点推测及功能分析

作者：王鑫; 张伶俐; 林芸竹; 刘砚韬^*

来源：四川大学学报(自然科学版), 2022, 59(05): 157-161.

DOI：10.19907/j.0490-6756.2022.056001

• DNA拓扑异构酶Ⅱβ结合蛋白1(TopBP1)
• 脱氧核糖核酸(DNA)
• DNA损伤应答

为阐明DNA拓扑异构酶Ⅱβ结合蛋白1(TopBP1)参与DNA损伤修复应答的分子机制，本研究通过生物信息学分析，发现多个潜在的TopBP1磷酸化位点T860,S887,T1104及T1167,利用分子生物学手段从人cDNA文库中扩增并获得TopBP1克隆质粒，将上述磷酸化位点突变为丙氨酸，观察突变质粒转染细胞对DNA损伤修复的应答反应.结果显示，在粒子射线照射或化疗药物处理细胞后，第1104丙氨酸突变(T1104A)的TopBP1蛋白导致pRPA32-S33的磷酸化水平大幅降低，同时细胞周期检验点失活，严重阻滞了DNA应激反应，证实T1104是TopBP1参与DNA损伤修复的关键活性位点.

• 单位
  四川大学华西第二医院