凝胶排阻色谱-多角度激光散射法测定破伤风类毒素相对分子质量分布

作者：马庆华; 朱向国^*; 郑佳; **; 杜琳

来源：应用化学, 2021, 38(06): 739-742.

DOI：10.19894/j.issn.1000-0518.200374

• 破伤风类毒素
• 相对分子质量分布
• 凝胶排阻色谱与多角度激光散射仪联用法

为更好地表征精制破伤风类毒素(精制TT)相对分子质量分布的情况,利用凝胶排阻色谱与多角度激光散射仪联用法(SEC-MALS法)对精制破伤风类毒素分子质量及其分布进行了初步探索。通过优化实验参数,确定了最佳实验条件:流动相为0.2 mol/L磷酸盐缓冲液-1%异丙醇(pH=7.0)(PBS),样品浓度为2.0 mg/mL,柱温为25℃,流速为0.5mL/min。与聚丙烯酰胺凝胶电泳法相比,SEC-MALS法能够提供准确的精制TT单体分子质量测量值。此外,SEC-MALS法能够得到质均相对分子质量Mw、数均相对分子质量Mn以及二者的比值——多分散性Mw/Mn等重要物理参数,可以更加准确地反映精制TT溶液中单聚体、二聚体、多聚体分布状态,可以量化分子大小批间差异情况,有利于评价精制TT生产过程中的工艺调整或变化对蛋白单体收率的影响,当作为多糖蛋白结合疫苗常用的载体蛋白时,有利于以准确可量化的质量参数参与结合物的关键工艺控制。