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摘要
B蛋白是新型鸭呼肠孤病毒（NDRV）的外衣壳蛋白之一，可诱导宿主机体产生群特异性抗体。为制备NDRVσB蛋白的单克隆抗体（MAb），并鉴定其抗原表位，本研究利用原核表达后纯化的重组σB蛋白（rσB）免疫BALB/c小鼠，取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞融合，以纯化的rσB为包被抗原，通过间接ELISA方法筛选出3株杂交瘤细胞，其分泌的MAb分别命名为10-A5、A1-A9和B7-E5。将NDRV ZJ00M株以MOI 0.01感染DF-1细胞72 h后收获细胞，通过western blot鉴定获得的MAb与天然表达的σB蛋白的反应性；分别将NDRV ZJ00M株、鸭经典呼肠孤病毒（CDRV）ZJ2000M株和鸡呼肠孤病毒（ARV）S1133株均以MOI 0.01感染DF-1细胞，48 h后经间接免疫荧光试验（IFA）鉴定MAb的交叉反应性。Western blot结果显示，3株MAb均在41 ku出现特异性条带，表明其均能够与NDRVσB蛋白发生特异性反应；IFA结果显示：3株MAb均与NDRV反应，而不与CDRV和ARV发生交叉反应。上述结果表明，本研究制备的MAb反应原性和特异性均较强。利用人工合成的37条NDRVσB蛋白多肽及其截短的多肽，采用肽扫描法结合间接ELISA方法对3株MAb识别的抗原表位进行鉴定，并通过抗原表位氨基酸序列比对，分析该抗原表位在禽正呼肠孤病毒各成员中的保守性。结果显示，3株MAb识别的最小抗原表位均为33DIEEFHTPDVI43，且该抗原表位氨基酸序列在不同地域和不同宿主来源的NDRV分离株间的保守性均较高。本研究首次制备了NDRVσB蛋白的MAb，并鉴定了其抗原表位及该表位的保守性，为NDRV检测方法和表位标记疫苗的研究奠定基础。
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