前列腺特异性膜抗原(PSMA)纳米抗体基因的原核表达及天然噬菌体纳米抗体库筛选

作者：张笑利; 陈琨; 江克华; 何洁; 安宇; 何忠明; 孙发^*

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2022, 38(11): 1030-1035.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.009483

• 前列腺特异性膜抗原(PSMA)
• 纳米抗体
• 噬菌体纳米抗体库
• 原核表达

目的 筛选出抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)的纳米抗体。方法 利用天然噬菌体纳米抗体库，以PSMA为靶抗原进行三轮的淘选，采用ELISA鉴定阳性克隆，并进行测序分析，将筛选到的阳性克隆基因序列插入pET28a原核表达载体中，并转化至大肠杆菌BL21中，经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白的表达，利用Ni柱进行亲和纯化，通过SDS-PAGE验证纯化产物。结果 筛选获得4条PSMA纳米抗体序列重链可变区1(VHH1)、 VHH2、 VHH3、 VHH4, VHH1序列未能获得明确的原核表达蛋白，VHH2、 VHH3、 VHH4蛋白均表达。纯化后获得了纯度高、相对分子质量(Mr)约为17 000的抗PSMA纳米抗体。结论 通过天然噬菌体纳米抗体库淘筛，成功获得抗PSMA的纳米抗体序列并进行了原核表达和纯化。

• 单位
  贵州大学; 贵州省人民医院