重组病毒法捕获宫颈癌循环肿瘤细胞的初步研究

作者：徐赐栋; 邹建文; 李军; 吴基良; 张开泰; 阎蓓; 刘滨磊^*

来源：湖北科技学院学报(医学版), 2019, 33(02): 99-88.

DOI：10.16751/j.cnki.2095-4646.2019.02.0099

• 宫颈癌
• 循环肿瘤细胞
• 单纯疱疹病毒

目的构建新的含有表达绿色荧光蛋白(GFP)的单纯疱疹病毒(OHSV2-GFP),初步验证其对循环肿瘤细胞特异性示踪作用。方法采用PCR、分子克隆及同源重组技术,从HG52野生病毒株的基因组中剔除ICP34.5基因并插入GFP表达序列,构建OHSV2-GFP。抽取健康志愿者外周血4mL,将Hela细胞按10、100、500个加入外周血中后,按照MOI=1比例转染重组病毒OHSV2-GFP+,然后用流式细胞仪进行该方法检出率测定;收集40例正常人、15例宫颈炎患者和20例宫颈癌患者外周血4mL,裂解去除红细胞后,按照MOI=1的比例转染重组病毒OHSV2-GFP+,24h后收集细胞,流式细胞仪检测CD45+/GFP-细胞并计数,初步检测该方法临床应用的可行性。结果将Hela细胞按10、100、500个加入外周血中后,检测结果显示,检出数分别为6.3、61.7、300.5,总体检出率为61.7%,线性回归分析显示应用此方法捕获的CTC数量与预先加的肿瘤细胞数呈线性关系,R2≥0.95。宫颈癌患者的GFP+/CD45-细胞数(10.90±2.3)个明显高于正常人(0.38±0.12)和宫颈炎患者(0.33±0.09)个,差异具有显著性(P<0.01)。结论本研究应用循环肿瘤细胞能够被该重组病毒捕获的特性,建立一种新的CTCs检测技术,并针对此技术的可靠性进行了证实,为进一步的临床应用研究打下了基础。

• 单位
  湖北科技学院; 武汉大学; 中国医学科学院北京协和医学院; 武汉滨会生物科技股份有限公司