Grb7蛋白SH2结构域的表达及其纯化的方法

作者：张丹; 赵敏迪; 高友鹤

来源：蚌埠医学院学报, 2012, (04): 376-379.

DOI：10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2012.04.009

• 生长因子受体结合蛋白质7
• SH2结构域
• 谷胱甘肽巯基转移酶
• 基因表达
• 纯化 growth factor receptor-bound protein 7
• SH2 domain
• glutathione sulfhydryl transferase
• gene expression
• purification

目的:探讨Grb7蛋白SH2结构域的表达及其纯化的方法。方法:将Grb7蛋白SH2结构域编码基因与谷胱甘肽巯基转移酶(GST)标签编码基因构建为融合基因,插入原核表达载体pGEX-4T-1的多克隆酶切位点EcoRⅠ与XhoⅠ之间,挑选测序正确的质粒将其转染至BL 21感受态细胞内,感受态细胞于37℃摇培至其OD值达到0.6～0.8后,经0.2 mmol/L IPTG 25℃过夜诱导表达融合蛋白,MALDI-TOF质谱检测蛋白纯化产物,SPR生物传感器(Biacore 3000)检测纯化蛋白与天然配体磷酸化肽段的相互作用。结果:GST-Grb7 SH2结构域融合蛋白在裂解菌液的上清液中存在,50...

• 单位
  医学分子生物学国家重点实验室; 中国医学科学院基础医学研究所; 北京协和医学院; 基础医学院