本发明属于抗肿瘤药物技术领域,公开了一种具有内质网靶向的有机荧光探针及其制备方法和应用。所述具有内质网靶向的有机荧光探针结构式为式I。本发明还公开了有机荧光探针的制备方法。本发明的荧光探针能够快速进入细胞,通过插入内质网蛋白的疏水空腔中靶向内质网,具有快速靶向内质网的成像能力,通过化疗作用诱导癌细胞内氧化应激,引起免疫原型细胞死亡,提高肿瘤细胞的免疫原性,并进一步引起机体持久的抗肿瘤免疫应答。本发明的有机荧光探针用于内质网荧光成像和/或制备肿瘤细胞免疫应答的产品。