6-苄基腺嘌呤人工抗原的合成及鼠源多克隆抗体的制备

作者：孟继秋; 胡骁飞; 王耀; 邢云瑞; 曹金博; 陈琳琳; 孙亚宁; 张改平^*

来源：河南农业科学, 2021, 50(05): 157-164.

DOI：10.15933/j.cnki.1004-3268.2021.05.022

• 6-苄基腺嘌呤
• 6-苄基腺苷
• 人工抗原
• ELISA
• 多克隆抗体

为制备6-苄基腺嘌呤(6-benzylaminopurine, 6-BA)的抗体,利用高碘酸盐法将6-BA的代谢产物6-苄基腺苷(6-benzylaminopurine riboside, 6-BAR)分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备出免疫抗原6-BAR-BSA和包被抗原6-BAR-OVA。采用紫外扫描(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)对人工抗原进行初步鉴定。用6-BAR-BSA以背部皮下多点注射的方式免疫4只BALB/c小鼠(编号1—4),免疫剂量50μg/只,间隔21 d, 4免后10 d断尾采血制备鼠源多克隆抗体血清。间接ELISA测定血清效价,间接竞争ELISA测定血清敏感性及特异性。结果显示,6-BA人工抗原制备成功,免疫小鼠血清效价均达到1∶51 200以上,2号小鼠血清效价最高为1∶204 800,且其对6-BA的半数抑制浓度(IC50)为13.48μg/L,线性范围为0.26～701.45μg/L,与激动素、赤霉素、4-氯苯氧乙酸钠、腐霉利、呋喃苯烯酸钠、BSA、OVA交叉反应率均小于0.01%。综上,成功制备了6-BA人工抗原,并通过动物免疫得到高敏感性、高特异性鼠源多克隆抗体。

• 单位
  河南科技大学; 河南农业大学; 河南省农业科学院; 食品与生物工程学院