人脂肪源性血管外膜细胞的分离培养和生物学功能分析

作者：周芮; 张磊; 杨小萍; 许飞; 胡代宏; 杨婷婷; 郑波^*

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2021, 37(04): 315-321.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.009175

• +hAD-PC)" name="keyword">人脂肪源性血管外膜细胞(CD146+hAD-PC)
• 间充质干细胞
• 传代培养
• 多参数流式细胞术

目的建立人脂肪源性血管外膜细胞(CD146+ hAD-PC)体外分离纯化及培养的可行性方法,并进行生物学特性鉴定和分化能力分析。方法通过胶原蛋白酶消化法及多参数流式细胞术从人脂肪组织中分离纯化CD146+ hAD-PC(CD146+CD34-CD144-CD45-),并进行体外培养扩增,倒置显微镜下连续观察不同时期细胞的生长情况及形态变化;利用CCK-8法检测第6代(P6)、 P9及P12的CD146+ hAD-PC增殖情况,研究不同代次增殖能力及活性差异;利用多参数流式细胞术检测CD146+ hAD-PC表面标志物的表达;经成脂诱导分化油红O染色、成骨诱导分化茜素红染色、成软骨诱导分化阿利新蓝染色鉴定其多向分化潜能。结果经多参数流式细胞术可从脂肪组织中得到纯度为(93.3±2.79)%的CD146+hAD-PC,经体外培养能够稳定传代。P6、 P9的CD146+ hAD-PC培养至第3天开始处于生长对数期,生长曲线近"S"型,P12的细胞增殖速度较缓。自第5天起P12的细胞增殖活性低于P6的细胞。CD146+ hAD-PC高表达CD44、 CD73、 CD90、 CD105,不表达内皮细胞表面标志物CD34、 CD31及造血细胞标志物CD45。体外诱导分化显示,CD146+ hAD-PC可分化为脂肪细胞、成骨细胞及成软骨细胞。结论通过胶原蛋白酶消化法及多参数流式细胞分选术可以从人脂肪组织中分离出稳定传代的CD146+ hAD-PC,体外贴壁生长,具有多向分化能力。

• 单位
  宁夏医科大学总医院; 宁夏医科大学