病毒性出血败血症病毒实时荧光RT-RPA恒温检测方法的建立

作者：陈雨; 郑晓聪; 温智清; 贾鹏; 孙洁; 毛明光; 田城城; 黄倩君; 秦智锋; 刘荭^*

来源：中国兽医科学, 2020, 50(04): 417-422.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2020.0064

• 病毒性出血败血症病毒
• 逆转录重组酶聚合酶扩增技术
• 现场检测
• 快速检测

为建立一种简单、快速的病毒性出血败血症病毒(VHSV)检测方法,本研究通过比较分析VHSV N基因的保守序列,设计了多对引物和一条探针。经过筛选优化,建立了实时荧光RT-RPA检测方法。该方法在39℃恒温反应20 min即可快速、特异性地检测出VHSV,与其他水生动物病毒不发生交叉反应,该方法检测限为1.83×103PFU/mL,利用本研究方法对30份鲑鳟鱼临床样品以及9份鱼类疫病病原样品进行检测,检测结果与荧光定量PCR方法结果一致。上述结果表明,本研究建立的检测方法操作简单,反应灵敏,结果可靠,仪器依赖性低,适用于现场对VHSV快速检测。

• 单位
  深圳海关动植物检验检疫技术中心; 大连海洋大学