致牛腹泻4种细菌多重荧光定量PCR检测方法的建立及应用

作者：高睿; 徐伟; 罗艳; 谢晓刚; 李梦磊; 张琪^*; 许信刚^*

来源：动物医学进展, 2023, 44(06): 21-27.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2023.06.004

• 大肠埃希氏菌
• 沙门氏菌
• 志贺氏菌
• 产气荚膜梭菌
• 多重荧光定量PCR

随着规模化和集约化养牛业的不断发展，多种致病菌混合感染造成牛腹泻严重制约了养牛业的快速发展，对腹泻病原进行快速准确鉴别诊断对疫病防控至关重要。根据沙门氏菌的ivnA基因、大肠埃希氏菌的23S rRNA基因、产气荚膜梭菌的plc基因以及志贺氏菌的ipaH基因的保守区域建立了可同时检测这4种细菌的多重荧光定量PCR检测方法，并对其特异性、灵敏性和重复性进行了研究。结果显示，建立的标准曲线线性关系良好；优化后的检测方法仅可特异性扩增出4种目标细菌；对大肠埃希氏菌、沙门氏菌、志贺氏菌和产气荚膜梭菌的最低检出限分别为9.4×101copies/μL、1.2×102copies/μL、9.1×101copies/μL和1.4×103copies/μL,该方法的灵敏性高于普通单项PCR检测方法10倍；批内、批间差异均小于5%。用此方法检测人工感染病料，每份病料均检测出对应攻毒细菌的荧光信号。以上结果表明，所建立的多重荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好，可用于致牛腹泻细菌的实验室检测。

• 单位
  杨凌职业技术学院; 西北农林科技大学