人抗菌肽HBD-2的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定

作者：王国兴; 冯云; 吴琦; 阎蓉华; 李洵; 王伯瑶; 黄宁

来源：生物医学工程学杂志, 2005, (03): 575-579.

• HBD-2
• 基因重组
• 融合蛋白
• 多克隆抗体 HBD-2 Recombinant prokaryotic construct GST-HBD-2 fusion protein Polyclonal antibody

制备人β-防御素2(HBD-2)多克隆抗体,以用于HBD-2蛋白水平表达的检测。提取人肠腺上皮细胞株Caco-2总RNA,设计引物,应用RT-PCR从其总RNA中扩增HBD-2成熟肽cDNA片段,以pGEX-1λT为载体,构建原核表达质粒pGEX-1λT-HBD-2。大肠杆菌裂解物经亲合层析纯化后获得分子量约30kDa的融合蛋白,将此融合蛋白免疫新西兰兔,并用正辛酸-硫酸铵分步沉淀法初步纯化抗血清,ELISA法显示抗血清对HBD-2的效价为1∶12800,Western印迹显示抗血清可识别HBD-2。本实验结果证明应用重组融合小肽代替白蛋白或甲状腺-肽偶联免疫可获得其高效价的识别HBD-2的多...

• 单位
  四川大学