重组幽门螺旋杆菌黏附素A的可溶性表达、纯化及其免疫学性质分析

作者：刘昆梅; 张富蕊; 李欣; 张国林; 刘宏鹏^*; 郭乐^*

来源：中国生物制品学杂志, 2023, 36(03): 310-314.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003842

• 幽门螺旋杆菌黏附素A
• 表达
• 纯化
• 多克隆抗体

目的 通过分子克隆、蛋白表达及纯化等技术获得重组幽门螺旋杆菌黏附素A(recombinant H. pylori adhesin A,rHpaA)，免疫BALB/c小鼠，制备anti-HpaA多克隆抗体后，分析其抗体特异性。方法 利用Phyre2和DNAstar生物信息学软件分析rHpaA的三维结构及抗原性质；通过PCR长片段DNA合成技术获得黏附素HpaA基因，插入质粒pCzn1中，制备重组质粒pCzn1-rHpaA，转化E. coli Arctic Express(DE3)，经IPTG诱导表达、Ni-IDA亲和层析纯化后，获得rHpaA蛋白，Western blot鉴定其反应原性。将rHpaA辅以弗氏佐剂免疫雄性BALB/c小鼠，共6只，制备antiHpaA多克隆抗体，ELISA法鉴定其抗体特异性。结果 rHpaA具有较好的三维结构及抗原性质。双酶切鉴定及基因测序证明，重组质粒pCzn1-rHpaA含有完全正确的HpaA基因序列。重组菌株pCzn1-rHpaA/Arctic Express可溶性表达目的蛋白rHpaA，约占上清总蛋白的68.3%，纯度达98.1%。rHpaA可与anti-His和anti-H. pylori抗体相结合；antiHpaA多克隆抗体可特异性识别rHpaA和H. pylori裂解物。结论 经低温诱导表达和蛋白纯化等技术，可获得高纯度目的蛋白rHpaA，制备的anti-HpaA多克隆抗体具有良好的特异性，为研究H. pylori相关诊断试剂奠定了实验基础。

• 单位
  宁夏临床病原微生物重点实验室; 宁夏医科大学