利用CRISPR/Cas9技术建立小鼠转基因新型胚胎干细胞系

作者：付宇婷; 曹硕; 陈杨林; 吴宝江; 多曙光; 李喜和; 包斯琴

来源：内蒙古大学学报(自然科学版), 2019, 1-14.

• 胚胎干细胞
• CRISPR/Cas9
• Bdh2
• Dnmt3a
• Dusp9

胚胎干细胞因其具有体外自我更新以及多向分化的能力,成为研究基因功能、细胞治疗和组织再生等的有力工具。胚胎干细胞的基因敲除模型在基因功能研究中起着重要作用。我们利用实验室现有的G3-AH和t WG3II-2两种胚胎干细胞系,通过脂质体转染嘌呤霉素(puromycin)标记的PX459-sg RNA载体,使用CRISPR-Cas9技术分别构建Bdh2、Dnmt3a和Dusp9敲除的胚胎干细胞系,通过基因型鉴定、PCR产物测序、q PCR和Western Blot等实验得到Bdh2、Dnmt3a和Dusp9纯合缺失的胚胎干细胞系。之后,q PCR、免疫荧光染色分别检测了Bdh2、Dnmt3a和Dus...

• 单位
  内蒙古大学; 中国科学院动物研究所