外泌体lncRNA H19在miR-7/KLF4/VEGF调控人肺腺癌细胞迁移和侵袭中的作用研究

作者：王林^*; 易基群; 江高峰

来源：新医学, 2021, 52(10): 745-751.

• 长链非编码核糖核酸H19
• 微核糖核酸-7
• 侵袭
• 迁移

目的探讨外泌体长链非编码RNA H19(lncRNA H19)调控人肺腺癌细胞迁移和侵袭作用及机制。方法收集确诊肺腺癌并经影像学诊断已发生远处转移患者(转移组)或无远处转移患者(非转移组)以及正常人群(正常对照组)各30例外周血标本,分离单核细胞获得血浆上清液分离外泌体,同时取培养人肺腺癌细胞系A549细胞时收集的培养上清液分离外泌体,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测并比较组间外泌体lncRNA H19 mRNA表达差异。并采用慢病毒介导的lncRNA H19特异性小干扰RNA(shRNA)构建稳定敲低lncRNA H19的人肺腺癌A549细胞模型,荧光素酶验证lncRNA H19通过吸附结合微RNA-7(miR-7),划痕实验、Transwell实验检测稳定敲低lncRNA H19对A549细胞迁移、侵袭能力的影响,蛋白免疫印迹法检测稳定敲低lncRNA H19对miR-7及其下游的信号通路蛋白Kruppel样因子4(KLF4)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平的影响。结果外泌体被成功分离。与非转移组肺腺癌患者相比,转移组肺腺癌患者外周血外泌体lncRNA H19 mRNA表达增加(P <0.01)。A549细胞中,与对照细胞相比,稳定敲低lncRNA H19细胞的外泌体lncRNA H19 mRNA表达减少(P <0.01)。细胞划痕实验和Transwell实验显示,敲低lncRNA H19的A549细胞迁移和侵袭的能力下降。野生型lncRNA H19与miRNA-7共转染后A549细胞荧光度值下降(P <0.01),突变型lncRNA H19与miRNA共转染后A549细胞荧光度值未见明显变化(P> 0.05)。A549细胞中,稳定敲低lncRNA H19后KLF4和VEGF蛋白表达水平均有所下调(P均<0.05)。结论外泌体lncRNA H19可能在肺腺癌细胞迁移和侵袭过程中发挥作用,且这种作用可能与竞争性结合miR-7及KLF4/VEGF信号通路有关。

• 单位
  广州市红十字会医院; 暨南大学附属广州红十字会医院