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摘要
目的:建立新型定点修饰的聚乙二醇化重组人生长激素(PEG-rhGH)修饰位点的研究方法，为该类新型修饰技术产物的质量评价提供依据。方法:采用MALDI-TOF质谱分析修饰产物中聚乙二醇(PEG)的修饰个数及修饰肽段的质量数；采用LC-Q-TOF质谱分析修饰位点，分析色谱柱为UPLC色谱柱(Protein ACQUITY BEH C4 Column, 150 mm×2.1 mm, 1.7μm, 300?),以0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液为流动相，进行梯度洗脱，柱温为40℃。质谱数据采集条件为MSE模式，一级质谱能量4 eV,二级碎裂电压30～55 eV。结果:修饰蛋白中PEG的平均相对分子质量为30 000,并且每个PEG-rhGH分子中仅存在1个PEG修饰；原型蛋白重组人生长激素中第134位精氨酸被替换为赖氨酸，且该赖氨酸的ε-氨基与连接子HOOC-O-CH2-CH2-N3中的羧基端共价结合，连接子另一端的叠氮基团与活化后的PEG偶联后生成修饰产物。结论:联合运用多种质谱技术，通过比对人生长激素国家对照品、原型蛋白与修饰蛋白的酶切肽图谱及对特定肽段的一级、二级碎片的分子量分析，可以确定新型定点修饰的PEG-rhGH的修饰位点。
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单位中国食品药品检定研究院; 吉林大学
