缺氧诱导滋养细胞野生型p53诱导磷酸酶上调代偿凋亡的机制

作者：谭彬; 童超; 袁雨; 林俐; 漆洪波^*

来源：中华围产医学杂志, 2019, (10): 712-721.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1007-9408.2019.10.006

• 先兆子痫
• 细胞低氧
• 滋养层
• 蛋白质磷酸酶2C
• 细胞凋亡

目的 探讨野生型p53诱导磷酸酶(wild-type p53-induced phosphatase, Wip1)依赖p53途径调控滋养细胞凋亡的机制,为子痫前期发病机制提供新的研究方向。方法 收集2017年6月至2018年12月于重庆医科大学附属第一医院剖宫产分娩的正常孕妇(15例)与子痫前期孕妇(13例)的胎盘组织,收集早孕期(10例)人工流产者的绒毛和蜕膜组织；取绒毛外滋养细胞株HTR8/SVneo细胞,采用物理缺氧和化学缺氧方法进行缺氧培养。利用蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应分别检测胎盘组织中Wip1蛋白和mRNA水平；免疫组织化学方法和免疫荧光法检测Wip1组织细胞定位；采用病毒感染和缺氧干扰Wip1表达后,通过流式细胞技术检测细胞凋亡水平变化,蛋白质印迹法检测p53、磷酸化p53(phospho-p53, p-p53)、鼠双微同源体2(mouse double minute 2 homolog,Mdm2)和切割型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase3, cl-cas3)凋亡通路相关分子的变化,并利用免疫共沉淀检测Wip1对Mdm2与p53相互作用的影响,并结合运用Mdm2-p53特异性抑制剂NVP-CGM097封闭结合位点进一步验证Wip1经Mdm2-p53途径调控滋养细胞凋亡。采用Student-t检验、Welch’s-t检验和单因素方差分析进行统计学分析。结果 (1)胎盘组织中Wip1主要表达于滋养细胞,在子痫前期胎盘(mRNA：1.711±0.141与0.860±0.126,t=4.496；蛋白：0.449±0.027与0.192±0.019,t=7.902)和物理缺氧(蛋白：1.376±0.086与0.977±0.114,t=2.792)、化学缺氧(蛋白：1.243±0.057与0.381±0.045,t=11.910)培养细胞中较相应对照组显著上调(P值均<0.05)。(2)与不影响Wip1表达的相应对照组比较,过表达Wip1可降低p53蛋白(物理缺氧：0.185±0.024与0.572±0.072；化学缺氧：0.400±0.067与0.803±0.064)、cl-cas3蛋白(物理缺氧：0.243±0.034与0.529±0.072；化学缺氧：0.179±0.011与0.368±0.025)和p-p53/53水平(物理缺氧：1.326±0.129与2.100±0.187；化学缺氧：0.473±0.028与0.925±0.036),降低细胞凋亡率[物理缺氧：(8.925±1.092)%与(17.610±1.980)%；化学缺氧：(13.910±1.886)%与(24.650±1.622)%],继而促进Mdm2-p53结合；敲降Wip1可引起相反效应(P值均<0.05)。(3)在结合运用NVP-CGM097封闭Mdm2-p53结合位点情况下,过表达和敲降Wip1表达均不能影响p53和cl-cas3表达。结论 缺氧状态下,滋养细胞通过上调Wip1促进Mmd2-p53结合以代偿细胞因缺氧造成的p53累积,外源性上调滋养细胞Wip1水平可使细胞因缺氧所致的凋亡水平得以恢复。

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院