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摘要
目的构建无精症相关蛋白2(DAZAP2)真核表达重组载体,对基因进行细胞定位。方法提取1例正常人骨髓单个核细胞总RNA,以逆转录产物作为模板,PCR扩增DAZAP2的开放阅读框(ORF)。采用定向克隆法与真核表达载体pEGFP-N1连接,转染大肠杆菌DH5α,经双酶切及测序证实。脂质体法转染COS7细胞后,运用Western印迹及免疫定位技术检测表达产物。结果测序证实真核表达重组质粒的阅读框没有发生改变,转染重组质粒的细胞表达融合蛋白DAZAP2-EGFP,主要在COS7细胞质中表达。结论成功获得了DAZAP2真核表达重组质粒并有效地表达重组融合蛋白,DAZAP2主要定位在细胞质中的泡状分泌结构上。
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单位广州医学院第二附属医院; 中南大学
