嗜碱芽孢杆菌Bacillus sp.F26过氧化氢酶的分离纯化及性质研究(英文)

作者：张心齐; 薛燕芬; 赵爱民; 堵国成; 许正宏; 陈坚; 马延和

来源：生物工程学报, 2005, (01): 71-77.

DOI：10.13345/j.cjb.2005.01.016

• 过氧化氢酶
• Bacillus

从一株低度嗜盐、兼性嗜碱芽孢杆菌Bacillussp .F2 6中纯化得到一种碱性过氧化氢酶 ,并对该酶进行了性质研究。纯化过程经硫酸铵沉淀、阴离子交换层析、凝胶过滤层析及疏水层析四步最终获得电泳纯的目标酶 (纯化 5 8 5倍 )。该过氧化氢酶的分子量为 14 0kD ,由两个大小相同的亚基组成。天然酶分子在 4 0 8nm处显示特征吸收峰 (Soretband)。吡啶血色素光谱显示了酶分子以原卟啉Ⅸ (protohemeⅨ )作为辅基。计算获得酶的表观米氏常数为 32 5mmol L。该过氧化氢酶不受连二亚硫酸钠的还原作用影响 ,但被氰化物、叠氮化物和 3_氨基_1,2 ,4_三唑 (单功能过氧化氢酶的专一抑制剂 )强烈抑制。以邻联茴香胺、邻苯二胺和二氨基联苯胺作为电子供体测定酶活时 ,该酶不显示过氧化物酶活性。同时 ,酶的N_端序列比对结果说明 ,该过氧化氢酶与单功能过氧化氢酶亚群有一定的相似性 ,而与双功能过氧化氢酶亚群及猛过氧化氢酶亚群均没有同源性。因此 ,本文将纯化的碱性过氧化氢酶定性为单功能过氧化氢酶。此外 ,该酶具有热敏感的特点 ,且酶活在pH 5～ 9的范围内不受pH影响 ,此后 ,活性随着pH的升高而升高 ,并在pH 11处有明显的酶活高峰。 2 0℃、pH 11条件下的酶活半衰期达 4 9h。在pH 11的高碱条件下表现出最高活力和一定

• 单位
  中国科学院微生物研究所; 江南大学; 中国生物技术发展中心