大鼠Hes1腺病毒干扰载体构建及功能鉴定

作者：周学亮; 方义湖; 赵勇; 邹斌; 徐华; 吴起才; 刘季春

来源：重庆医学, 2016, 45(34): 4757-4759.

• 腺病毒科
• RNA干扰
• 寡核苷酸序列分析
• Hes1
• 质粒构建
• 病毒包装

目的构建高滴度大鼠Hes1腺病毒干扰载体(Ad-Hes1-shRNA)。方法设计3对Hes1-shRNA寡核苷酸序列,通过定向克隆构建pHBAd-U6-CMV-Hes1-shRNA干扰质粒,将pHBAd-U6-CMV-Hes1-shRNA和pHBAd-BHG共转染293T细胞,以包装Ad-Hes1-shRNA,利用改进TCID50法进行病毒滴度测定。Ad-Hes1感染H9c2心肌细胞,Western blot检测Hes1表达。结果 pHBAd-U6-CMV-Hes1-shRNA构建成功,Ad-Hes1-shRNA包装顺利,滴度为1.0×1011 PFU/mL,并可在H9c2心肌细胞内发挥干扰效应。结论 Ad-Hes1-shRNA包装成功,在心肌细胞中具有Hes1的干扰效应。

• 单位
  南昌大学第一附属医院