应用CRISPR/Cas9技术敲除Mda5基因对新城疫及传染性法氏囊病毒复制的影响

作者：钟菁; 孙玲玲; 张姝; 蒙园; 支怡飞; 涂黎晴; 徐天鹏; 濮黎萍; 陆阳清^*

来源：生物技术通报, 2022, 38(11): 90-96.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2022-0087

• Mda5
• 新城疫病毒
• 传染性法氏囊病毒
• CRISPR/Cas9
• 基因敲除

采用CRISPR/Cas9技术敲除DF-1的黑色素瘤分化相关基因5(melanoma-differentiation-associated gene 5，Mda5)，探索Mda5基因对新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)和传染性法氏囊病毒(infectious bursal disease virus，IBDV)复制的影响。通过CRISPR/Cas9技术构建Mda5敲除的DF-1细胞系；实时荧光定量PCR和免疫荧光法检测病毒感染Mda5敲除细胞后病毒RNA水平、细胞病变情况及抗病毒相关基因mRNA水平等。获得Mda5基因敲除的DF-1细胞；与对照组细胞相比，细胞形态、贴壁能力和增殖能力均无显著性差异；与对照组细胞相比，Mda5基因敲除的DF-1细胞感染IBDV后，IFN-β和PKR表达显著性下调，CH25H的表达和病毒复制水平均无显著性差异；感染NDV后，IFN-β表达和病毒复制水平显著性下调，CH25H表达量显著性上调，PKR表达无显著性差异。CRISPR/Cas9技术建立Mda5敲除的DF-1中，IFN-β虽然显著应答IBDV和NDV感染，但不能显著抑制病毒的复制，说明Mda5并非抗病毒复制的关键模式识别受体。

• 单位
  广西大学