采用Red重组系统敲除铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因

作者：余华; 熊浚智; 何晓梅; 盛哈蕾; 蔡文强; 谢玮; 张克斌

来源：中国人兽共患病学报, 2013, (02): 129-132+137.

• 铜绿假单胞菌
• 弹性蛋白酶
• 基因敲除
• Red重组系统 Pseudomonas aeruginosa
• elastase
• gene knock-out
• Red recombination system

目的敲除铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因,获得无弹性蛋白酶活性的铜绿假单胞菌菌株。方法采用PCR从pKD46质粒上扩增λ噬菌体的Red重组酶基因,并将其克隆到大肠杆菌和铜绿假单胞菌穿梭质粒pUCP多克隆位点上,电击转化铜绿假单胞菌PAO1感受态细胞,构建PAO1/pUCP-Red基因敲除体系。常规基因操作构建两端与弹性蛋白酶基因上、下游同源,中间为庆大霉素抗性基因的线性打靶片段;并将其电击转化pUCP-Red/PAO1感受态;采用庆大霉素和羧苄青霉素抗性平板初步筛选阳性重组菌;通过PCR、RT-PCR及弹性蛋白酶活性检测方法,鉴定菌株弹性蛋白酶基因的敲除情况。结果本研究通过构建Red重组系统,获得了...

• 单位
  新桥医院