脱水四环素诱导的大肠杆菌Targetron基因打靶系统构建

作者：崔古贞; 花登雄; 陈相好; 陈峥宏; 管玉祝; 谷俊莹^*

来源：现代预防医学, 2021, 48(16): 3005-3010.

• 大肠杆菌
• 脱水四环素诱导系统
• EGFP
• Targetron
• Ⅱ型内含子

目的在大肠杆菌中构建脱水四环素诱导的Targetron基因打靶系统,为微生物遗传改造提供可控的新型Targetron基因打靶工具。方法首先,分析大肠杆菌对脱水四环素的敏感性,筛选合适的诱导剂浓度。其次,以绿色荧光蛋白为报告基因,构建脱水四环素诱导的荧光蛋白报告系统,检测其诱导效果。然后,将上述验证的脱水四环素诱导系统与Ⅱ型内含子打靶元件组合,构建脱水四环素诱导型Targetron系统。最后,以大肠杆菌pyrF79a、lacZ1063a和lacZ635s三个基因位点为例,分析其在大肠杆菌中的打靶效率。结果脱水四环素诱导系统能够在大肠杆菌中诱导Targetron元件表达,使用0.2μg/ml脱水四环素诱导3 h该诱导型Targetron系统在pyrF79a、lacZ1063a和lacZ635s三个位点的打靶效率分别为(31.9%±5.2%)、(56.3%±10.8%)和(8.2%±3.6%)。结论在大肠杆菌中成功构建脱水四环素诱导的Targetron基因打靶系统,为微生物基因工程改造提供了良好的遗传工具。

• 单位
  贵州医科大学; 基础医学院; 遵义医科大学; 遵义市第一人民医院