大鼠Smad7基因慢病毒载体的构建及鉴定

作者：王惕; 周行涛; 戴锦晖; 瞿小妹; 褚仁远

来源：交通医学, 2011, 25(02): 129-132.

DOI：10.3969/j.issn.1006-2440.2011.02.007

• 慢病毒
• Smad7
• 转化生长因子β lentivirus
• Smad7
• transforming growth factor &beta

目的:构建大鼠Smad7慢病毒载体。方法:提取大鼠大脑皮质及肾脏的总RNA,逆转录PCR扩增获得Smad7目的基因片段,EcoRI及BamHI酶切连接慢病毒载体质粒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP,构建融合copGFP共表达的Smad7重组质粒。转化感受态细菌,筛选阳性克隆,经PCR扩增及测序鉴定正确后,Smad7重组质粒与慢病毒包装质粒共转染至包装细胞293TN,包装产生病毒液,转染H1299细胞株测定病毒滴度。结果:通过扩增获得1.3kb Smad7 cDNA片段,测序结果证实目的基因与Genebank序列完全一致,Smad7重组质粒慢病毒包装后获得Smad7慢病毒载体,病毒滴度为1.0×107ifu/ml。结论:成功构建大鼠Smad7慢病毒载体,为进一步研究Smad7基因的相关功能提供了适合的转染载体。

• 单位
  复旦大学附属眼耳鼻喉科医院