嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA1182的原核表达、纯化与免疫原性研究

作者：简思杰; 晁嘉; 孙薇; 陈锐; 丁锐; 陈琛^*; 刘祥^*

来源：河南农业科学, 2022, 51(11): 135-144.

DOI：10.15933/j.cnki.1004-3268.2022.11.016

• 嗜水气单胞菌
• 外膜蛋白AHA1182
• 原核表达
• 免疫原性
• 红鲫血浆
• 组织病理学切片
• 主动免疫

为探究嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA1182的免疫原性，依据AHA1182氨基酸序列，采用生物信息学分析嗜水气单胞菌、杀鲑气单胞菌、简氏气单胞菌、多样气单胞菌、舒氏气单胞菌、产碱普罗维登斯菌以及爱德华氏菌之间的亲缘关系；构建AHA1182原核表达菌株并确定最佳诱导表达条件；采用包涵体洗涤及SDS-PAGE切胶纯化方法获得AHA1182蛋白并免疫红鲫；利用Western blot检测红鲫抗AHA1182蛋白血清的特异性与效价；采用酶联免疫吸附(ELISA)法模拟红鲫抗AHA1182蛋白抗体血清与嗜水气单胞菌的体外相互识别作用；通过测定酸性、碱性磷酸酶(ACP、AKP)活性与细胞吞噬作用，评价非特异性免疫；利用组织病理学切片探究AHA1182蛋白免疫对红鲫内脏的影响。结果显示，AHA1182蛋白家族在不同菌株间均具有亲缘性，尤其在气单胞菌间亲缘关系较近，由此推测，AHA1182蛋白抗血清具有交叉免疫保护作用；成功克隆、表达、纯化AHA1182，最佳诱导条件：菌液浓度OD600=1.0,IPTG终浓度为0.5 mmol/L，在28℃条件下诱导8 h；红鲫AHA1182蛋白抗血清具有良好的特异性，AHA1182蛋白抗体与嗜水气单胞菌特异性结合(滴度可达1∶3 200);AKP、ACP、细胞吞噬作用均显示，AHA1182蛋白可激活红鲫非特异性免疫。从组织病理学切片可以看出，AHA1182蛋白对红鲫内脏结构无影响。综上，嗜水气单胞菌AHA1182蛋白具有良好的免疫原性。

• 单位
  陕西理工大学; 阜阳师范大学