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摘要
目的扩增及鉴定包含人类p73基因TAp73β转录本蛋白编码区的cDNA片段,将此片段克隆入真核表达载体,转染肝癌细胞,观察其对肝癌细胞生物活性的影响。方法从手术活体组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增TAp73β基因全长编码序列CDS(full-length coding sequence),目的片段回收纯化后用限制性内切酶酶切及测序两种方法鉴定目的片段正确与否并检测其纯度、浓度;并转染肝癌Hep3B细胞,用MTT法进行细胞凋亡检测。结果该扩增片段经限制性核酸内切酶酶切图谱分析,与预期结果吻合,转染的肝癌Hep3B细胞出现凋亡。结论包含人类p73基因TAp73β转录本蛋白编码区的cDNA片段被成功扩增且末端带有限制性核酸内切酶XbaⅠ、KpnⅠ识别序列,它对肝癌细胞有抑制作用,从而为临床上肝癌的治疗提供了新思路。
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