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摘要
目的探讨外源性一氧化碳释放分子2(CORM-2)对脂多糖(LPS)刺激人中性粒细胞杀菌功能的调控作用及其机制。方法采集1名健康成年志愿者的静脉血,分离出中性粒细胞后,按随机数字表法分为正常对照组、LPS组、LPS+10μmol/L CORM-2组、LPS+50μmol/L CORM-2组、LPS+无活性CORM-2(iCORM-2)组。正常对照组不进行任何处理;LPS组采用1μg/ml的LPS刺激;LPS+10μmol/L CORM-2组、LPS+50μmol/L CORM-2组、LPS+iCORM-2组在采用上述相同剂量LPS刺激的同时,分别采用10μmol/L CORM-2、50μmol/L CORM-2、50μmol/L iCORM-2进行干预,常规培养1 h后检测相关指标。用琼脂糖趋化模型检测中性粒细胞的趋化功能,流式细胞仪检测细胞颗粒释放及吞噬功能,酶联免疫吸附试验(ELISA)监测中性粒细胞颗粒释放功能的改变,蛋白质印迹法检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路蛋白Akt磷酸化的表达水平。以上指标均重复测定3次,对数据行单因素方差分析、SNK检验。结果正常对照组、LPS组、LPS+10μmol/L CORM-2组、LPS+50μmol/L CORM-2组、LPS+i CORM-2组细胞的趋化距离分别为(2241.33±67.30)、(919.00±55.02)、(1784.33±17.79)、(2202.33±91.69)、(1000.00±55.02)μm,LPS组细胞趋化距离较正常对照组明显降低(P <0.01);LPS组和LPS+iCORM-2组细胞的迁移距离较正常对照组明显降低(P <0.05);LPS+10μmol/L CORM-2组和LPS+50μmol/L CORM-2组细胞迁移距离较LPS组明显增加(P <0.01);LPS+iCORM-2组细胞细胞迁移距离与LPS组相近(P> 0.05)。对于中性粒细胞四级颗粒的释放研究,LPS刺激后中性粒细胞的颗粒释放均发生了明显的增加,而使用10μmol/L与50μmol/L CORM-2干预后,中性粒细胞的颗粒释放均得到明显抑制(P <0.01);使用50μmol/L iCORM-2干预后中性粒细胞颗粒释放与LPS组相近(P> 0.05)。用LPS刺激后中性粒细胞Phagocytosis平均荧光强度较正常对照组升高(P <0.05);而使用10μmol/L与50μmol/L CORM-2干预后中性粒细胞Phagocytosis平均荧光强度较LPS组明显增高(P <0.01);使用50μmol/L iCORM-2干预后中性粒细胞Phagocytosis平均荧光强度为与LPS组相近(P> 0.05)。LPS刺激后中性粒细胞蛋白Akt磷酸化与总Akt比值灰度扫描值比值与正常对照组相近(P> 0.05);而使用10μmol/L与50μmol/L CORM-2干预后中性粒细胞蛋白Akt磷酸化与总Akt比值灰度扫描值比值较正常对照组、LPS组明显增高(P <0.05);使用50μmol/L iCORM-2干预后中性粒细胞蛋白Akt磷酸化与总Akt比值灰度扫描值比值与LPS组相近(P> 0.05)。结论 CORM-2干预可以明显增加LPS刺激后中性粒细胞的早期凋亡,恢复中性粒细胞的趋化功能,并促进中性粒细胞的吞噬功能。CORM-2调控LPS刺激后中性粒细胞凋亡与吞噬功能,其机制可能与CORM-2促进磷酸化Akt有关。
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