重组双链RNA依赖的Caspase募集蛋白的表达、纯化及其活性

作者：王伟; 王伟华; 崔杰; 杨静华; 颜真

来源：中国生物制品学杂志, 2012, (05): 557-561.

DOI：10.13200/j.cjb.2012.05.38.wangw.008

• 双链RNA
• Caspase
• 病毒
• 细胞凋亡 Double strand RNA
• Caspase
• Virus
• Cell apoptosis

目的表表达并纯化重组双链RNA依赖的Caspase募集蛋白,并鉴定其生物学活性。方法将重组质粒pRSET-dsCARE转化大肠杆菌BL21(DE3),分别于37、28℃表达目的蛋白,Ni-NTA亲和层析纯化,纯化产物经SDS-PAGE、Western blot、HPLC鉴定目的蛋白,MTT法检测dsCARE对转染poly(I∶C)细胞的增殖抑制作用。结果dsCARE重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中呈组成性稳定表达,平均每升培养基可收获湿菌体约10 g;纯化产物的SDS-PAGE纯度达95.8%;纯化的目的蛋白能与抗-His多抗发生特异性反应;HPLC纯度达95.1%;每10 g湿菌体可纯...

• 单位
  波士顿大学; 第四军医大学