阴道毛滴虫巨噬细胞迁移抑制因子对THP-1巨噬细胞的作用

作者：林琳; 黄霜; 张峰源; 李家政; 姜旭淦; 陈盛霞^*

来源：中国血吸虫病防治杂志, 2023, 35(01): 29-37.

DOI：10.16250/j.32.1374.2022194

• 阴道毛滴虫
• 巨噬细胞迁移抑制因子
• THP-1巨噬细胞
• NLRP3炎症小体
• 细胞凋亡
• 细胞焦亡

目的 探讨阴道毛滴虫分泌的巨噬细胞迁移抑制因子(TvMIF)对THP-1巨噬细胞的作用。方法 原核表达重组TvMIF蛋白并纯化,鉴定后去内毒素。采用不同浓度(0、1、5、10、50 ng/mL和100 ng/mL)重组TvMIF蛋白作用于THP-1巨噬细胞,用细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK)-8检测重组TvMIF蛋白对THP-1巨噬细胞的毒性,采用流式细胞术检测细胞凋亡和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,采用实时荧光定量PCR技术(real-time fluorescence quantitative PCR,qPCR)检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptorprotein 3,NLRP3)、caspase-1、白细胞介素1β (interleukin-1β,IL-1β)、IL-18mRNA表达水平变化,采用Western blotting技术检测THP-1巨噬细胞中caspase1、NLRP3、消化道皮肤素D(gasdermin D,GSDMD)及GSDMD蛋白氨基端裂解片段(gasdermin D N-terminal,GSDMD-NT)、pro-IL-1β蛋白表达水平变化。结果 成功表达并纯化获得分子量为15.5 kDa的重组TvMIF蛋白。内毒素检测结果显示,已去除重组TvMIF蛋白的内毒素(浓度<0.1 EU/mL),可用于蛋白功能研究。流式细胞术检测结果显示,当重组TvMIF蛋白浓度≤10 ng/mL时可促进THP-1巨噬细胞凋亡,当TvMIF浓度为5 ng/mL时凋亡现象最为明显,当重组TvMIF蛋白浓度为50、100 ng/mL时可抑制THP-1巨噬细胞凋亡。当TvMIF蛋白浓度为1 ng/mL时,ROS含量明显升高。qPCR检测结果显示,1 ng/mL重组TvMIF蛋白作用THP-1巨噬细胞8 h后,caspase-1、NLRP3、IL-18和IL-1β mRNA水平均显著上升。Western blotting检测结果显示,1 ng/mL重组TvMIF蛋白刺激THP-1巨噬细胞后,caspase-1和NLRP3蛋白表达量显著上升,pro-IL-1β、GSDMD和GSDMD-NT蛋白表达量显著增加;用NLRP3炎症小体特异性抑制剂MCC950预处理后,GSDMD和GSDMD-NT蛋白表达水平显著下降。结论 高浓度重组TvMIF蛋白抑制THP-1巨噬细胞凋亡;低浓度重组TvMIF蛋白激活NLRP3炎症小体,促进THP-1巨噬细胞焦亡。

• 单位
  中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所; 江苏大学