MiR-2861/TIMP4轴在地塞米松-诱导小鼠骨质疏松症模型的分子机制研究

作者：孟开顺; 洪路贤; 梁莉萍^*

来源：中国骨质疏松杂志, 2023, 29(03): 336-360.

DOI：10.3969/j.issn.1006-7108.2023.03.006

• 地塞米松
• 骨质疏松症
• 成骨细胞
• miR-2816
• TIMP4

目的 研究与地塞米松-诱导的骨质疏松症密切相关的靶microRNAs分子及其作用机制。方法 在体动物实验，将小鼠随机分为Control组和地塞米松-诱导的骨质疏松症小鼠(Model)组；microRNA表达谱测序分析上述两组小鼠股骨近端骨组织中microRNAs的显著变化；生物信息学分析miR-2861与TIMP4的序列互作位点；qPCR检测两组小鼠股骨组织中miR-2816和TIMP4的RNA表达情况。双荧光素酶报告基因检测确证miR-2861与TIMP4的序列互作。体外细胞实验，对细胞进行地塞米松(Dex)处理后，分别敲低miR-2861或TIMP4;Annexin V-PI双标记流式细胞术检测各种处理前后细胞凋亡情况，Western blot检测各种处理前后凋亡相关蛋白的表达情况。结果 microRNA表达谱测序结果显示，与Control组小鼠相比，Model组小鼠股骨近端骨组织中miR-2861显著上调。双荧光素酶报告基因检测确证miR-2861对TIMP4的负调控作用。qPCR检测确证与Control组小鼠相比，Model组小鼠股骨组织中miR-2816表达显著上调，TIMP4表达显著下调(P<0.05)。体外细胞实验，与Control组相比，Dex处理组细胞凋亡显著上升(P<0.05),凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase-3、Bax/Bcl-2显著升高(P<0.05);与Dex+inhibitor NT组相比，Dex+miR-2861 inhibitor组细胞凋亡显著降低，凋亡相关蛋白表达显著下调，TIMP4表达显著升高(P<0.05);与Dex+TIMP4 siRNA NT组相比，Dex+TIMP4 siRNA组细胞凋亡显著升高，凋亡相关蛋白表达显著升高，TIMP4表达显著降低(P<0.05)。结论 Dex通过miR-2861/TIMP4轴促进地塞米松-诱导的骨质疏松症小鼠成骨细胞凋亡。

• 单位
  三亚市人民医院