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摘要
目的构建人可溶性肿瘤坏死因子α受体(sTNFR)真核表达载体pcDNA3·1(+)/sTNFR,为研究人sTNFR在哺乳动物细胞中的合成与表达提供条件。方法采用体外重组技术,将sTNFR的RT-PCR纯化产物及质粒pcDNA3·1(+)DNA经kpnⅠ和xhoⅠ双酶切、胶回收纯化酶切片段后,体外连接这两个酶切片段进行定向重组,再将重组DNA转化感受态细胞E.ColiCompetent Cells JM109。复苏后,在含氨苄青霉素的LB固体培养基上筛选阳性克隆,进行酶切及测序鉴定。结果挑取的LB固体培养基上的6个单菌落经证实均为阳性克隆,即sTNFR与pcDNA3·1(+)体外重组成功。结论将sTNFR cDNA成功地插入了真核表达载体pcDNA3·1(+)中,构建了质粒pcDNA3·1(+)/sTNFR。
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单位四川大学华西口腔医院; 广东省口腔医院; 南京医科大学
