miR-27a-3p通过靶向Sema7A调控病毒性心肌炎心肌细胞损伤的机制研究

作者：鄢文娟^*; 代悉尼; 谢达; 魏燕

来源：中华细胞与干细胞杂志(电子版), 2021, 11(02): 106-112.

• 病毒性心肌炎
• miR-27a-3p
• Sema7A
• 细胞损伤

目的探讨微小RNA-27a-3p (miR-27a-3p)过表达对病毒性心肌炎 (VMC)细胞损伤的影响及其可能的作用机制。方法原代培养大鼠心肌细胞,柯萨奇 B3 病毒 (CVB3)感染心肌细胞建立VMC模型 (CVB3组)。正常心肌细胞作为对照组,分别将miR-NC、miR-27a-3p mimics、si-NC、si-Sema7A分别转染至CVB3感染的心肌细胞,记为CVB3+miR-NC组、CVB3+miR-27a-3p组、CVB3+si-NC组、CVB3+si-Sema7A组。分别将miR-27a-3p mimics与pcDNA,miR-27a-3p mimics与pcDNA-Sema7A共转染至CVB3感染的心肌细胞,记为CVB3+miR-27a-3p+pcDNA组、CVB3+miR-27a-3p+pcDNA-Sema7A组。采用实时荧光定量聚合酶链反应 (qRT-PCR)与Western blot法分别检测细胞中miR-27a-3p、信号蛋白 7A (Sema7A)的表达水平;流式细胞术检测miR-27a-3p过表达或干扰Sema7A表达后心肌细胞的凋亡率;酶联免疫吸附 (ELISA)法检测细胞中肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素-1 (IL-1)的含量;双荧光素酶报告基因验证miR-27a-3p与Sema7A的靶向关系;Western blot检测B淋巴细胞瘤-2相关蛋白 (Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (cleaved caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2 (Bcl-2)蛋白表达。两组间比较采用独立样本t检验。结果与对照组比较,CVB3组miR-27a-3p的表达水平 (1.01±0.09比0.42±0.04)降低,Sema7A的mRNA和蛋白表达水平 (1.02±0.09比2.15±0.21、0.43±0.04比0.94±0.09)升高,TNF-α、IL-1水平[(403.56±38.16)pg/mL比 (1156.48±63.59)pg/mL、(29.45±3.54)pg/mL比 (136.57±12.47)pg/mL]升高,细胞凋亡率[(5.36±0.54)%比 (24.58±2.14)%]升高,Bax、cleaved caspase-3的表达水平升高,Bcl-2的表达水平降低 (P均 < 0.05);与CVB3+miR-NC组比较,CVB3+miR-27a-3p组TNF-α、IL-1水平[(1187.69±71.42)pg/mL比 (516.28±48.31)pg/mL、(147.25±14.05)pg/ mL比(43.68±5.02)pg/mL]和细胞凋亡率[(26.38±2.55)%比10.24±1.15)%]降低,Bax、cleaved caspase-3表达水平降低,Bcl-2表达水平升高 (P均< 0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-27a-3p可靶向调控Sema7A的表达;Sema7A过表达可逆转miR-27a-3p过表达对CVB3诱导的VMC细胞损伤的作用。结论 miR-27a-3p过表达可降低VMC细胞中炎症因子的表达及抑制细胞凋亡从而减轻心肌损伤,其作用机制可能与靶向调控Sema7A的表达有关。

• 单位
  湖北江汉油田总医院