黄芩苷通过调控巨噬细胞M2极化对脊髓损伤大鼠炎症反应的抑制作用

作者：许大勇^*; 李云朋; 魏景梅; 刘汝银

来源：吉林大学学报(医学版), 2021, 47(01): 158-167.

DOI：10.13481/j.1671-587X.20210122

• 脊髓损伤
• 黄芩苷
• 炎症反应
• Janus激酶1
• 信号转导及转录激活蛋白6
• 信号通路

目的:探讨黄芩苷对大鼠脊髓损伤(SCI)的保护作用,阐明其作用机制。方法:体内实验应用改良Allen氏打击法建立大鼠SCI模型,50只健康SD大鼠随机分为假手术组(给予生理盐水)、模型组(给予生理盐水,建立SCI模型)、黄芩苷组(SCI大鼠给予200 mg·kg-1黄芩苷)、黄芬苷+DMSO组(SCI大鼠给予200 mg·kg-1黄芩苷和0.2%DMSO)和黄芩苷+AS1517499 (STAT6通路抑制剂)组(SCI大鼠给予200 mg·kg-1黄芩苷和10 mg·kg-1 AS1517499),每组10只。造模成功后用贝索-比蒂-布雷斯纳汉(BBB)评分评价大鼠脊髓运动功能。体外实验用2.5μg·L-1脂多糖(LPS)和0.125μg·L-1干扰素γ(IFN-γ)诱导巨噬细胞(RAW264.7)M1型极化,10μg·L-1白细胞介素4 (IL-4)诱导RAW264.7细胞M2型极化。RAW264.7细胞分为对照组、M1型极化组、M2型极化组、M1型极化+黄芩苷组、M2型极化+黄芩苷组、M1型极化+黄芩苷+DMSO组和M1型极化+黄芩苷+AS1517499组。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠脊髓组织和RAW264.7细胞中炎症因子[白细胞介素12 (IL-12)、TNF-α、IL-4和白细胞介素10 (IL-10)]水平,Western blotting法检测大鼠脊髓组织和RAW264.7细胞中M1型巨噬细胞标记蛋白[诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和趋化因子5 (CCL-5)]及M2型巨噬细胞标记蛋白[精氨酸酶1 (Arg1)、甘露糖受体C1(MRC1)和Janus激酶1/信号转导及转录激活蛋白6 (JAK1/STAT6)通路相关蛋白]表达水平。结果:体内实验,与模型组比较,黄芩苷组大鼠BBB评分明显升高(P<0.05),脊髓组织中IL-12和TNF-α水平及iNOS、CCL-5和磷酸化信号转导及转录激活蛋白1 (p-STAT1)蛋白表达水平明显降低(P<0.05),IL-4和IL-10水平及Arg1、MRC1、磷酸化JAK1 (p-JAK1)和磷酸化STAT6(p-STAT6)蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01);与黄芩苷+DMSO组比较,黄芩苷+AS1517499组大鼠脊髓组织中IL-12和TNF-α水平及iNOS、CCL-5和p-STAT1蛋白表达水平明显升高(P<0.01),IL-4和IL-10水平及Arg1、MRC1和p-STAT6蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。体外实验,与M1型极化组比较,M1型极化+黄芩苷组RAW264.7细胞中iNOS、CCL-5和p-STAT1蛋白表达水平明显降低(P<0.05),p-JAKl和p-STAT6蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与M2型极化组比较,M2型极化+黄芩苷组RAW264.7细胞中Arg1和MRC1蛋白表达水平明显升高(P<O.05);与M1型极化+黄芩苷+DMSO组比较,M1型极化+黄芩苷+AS1517499组RAW264.7细胞中IL-12和TNF-α水平明显升高(P<0.05),IL-4和IL-10水平明显降低(P<0.05),p-JAK1蛋白表达水平明显升高(P<0.05),p-STAT6、Arg1和MRC1蛋白表达水平明显降低(P<0.05),iNOS和CCL-5蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:黄芩苷通过促进巨噬细胞M2型极化,激活JAK1/STAT6通路,对SCI大鼠炎症反应起到一定抑制作用。

• 单位
  河南省中医院