神经干细胞联合依达拉奉对氧糖剥夺-再灌注皮层神经元的保护作用及机制探讨

作者：宋士娜; 董闻平^*; 李常新; 段建钢

来源：中华神经医学杂志, 2023, 22(09): 918-922.

DOI：10.3760/cma.j.cn115354-20230428-00254

• 神经干细胞
• 依达拉奉
• 皮层神经元
• 氧糖剥夺-再灌注

目的探讨神经干细胞联合依达拉奉治疗对氧糖剥夺-再灌注(OGD-R)皮层神经元的保护作用及可能机制。方法 (1)体外培养胎龄14～16 d的SD胎鼠脑组织神经干细胞, 采用免疫荧光染色检测巢蛋白、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、微管相关蛋白2(MAP2)的表达进行鉴定。原代培养新生24 h内SD大鼠皮层神经元, 采用免疫荧光染色检测神经元特异性核蛋白(NeuN)、β-微管蛋白(β-Tubulin)的表达进行鉴定。(2)将原代培养的皮层神经元分为正常组(正常培养)、OGD-R模型组(缺氧处理1.5 h后再复氧培养24 h)、OGD-R+神经干细胞组(缺氧处理1.5 h后再复氧培养时, 加入神经干细胞与皮层神经元共培养24 h)、OGD-R+依达拉奉组(缺氧处理前加入100 μmol/L依达拉奉, 缺氧处理1.5 h后再复氧培养24 h)、OGD-R+神经干细胞组+依达拉奉组(缺氧处理前加入100 μmol/L依达拉奉, 缺氧处理1.5 h后再复氧培养时, 加入神经干细胞与皮层神经元共培养24 h), 24 h后采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测各组神经元的增殖, 流式细胞仪检测神经元凋亡率, 酶联免疫吸附实验(ELISA)检测神经元上清中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量, 实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blotting实验分别检测神经元Notch1、Hes1、Hes5 mRNA及蛋白的表达。结果 (1)免疫荧光染色检测结果显示神经干细胞球巢蛋白、GFAP、MAP2阳性, 皮层神经元NeuN及β-Tubulin阳性, 均鉴定成功。(2)与正常组比较, OGD-R模型组、OGD-R+神经干细胞组、OGD-R+依达拉奉组神经元细胞存活率减低、凋亡率增加、上清中IL-1β及TNF-α含量升高、Notch1 mRNA及蛋白的表达升高, 差异均有统计学意义(P<0.05)。与OGD-R模型组比较, OGD-R+神经干细胞组+依达拉奉组神经元细胞存活率升高、凋亡率减少、上清中IL-1β及TNF-α含量减低、Hes1和Hes5 mRNA及蛋白的表达均降低, OGD-R+依达拉奉组、OGD-R+神经干细胞+依达拉奉组神经元Notch1 mRNA及蛋白表达降低, 差异均有统计学意义(P<0.05)。结论神经干细胞联合依达拉奉治疗可以逆转OGD-R导致的神经元损伤, 可能是通过抑制炎性因子和Notch信号通路上关键信号分子Notch1、Hes1、Hes5的表达来发挥作用。

• 单位
  首都医科大学宣武医院; 山西医科大学第一医院; 神经内科; 太原钢铁(集团）有限公司总医院; 太原钢铁(集团)有限公司总医院