不同分离及培养方法对大鼠骨髓间充质干细胞生长增殖和生物学特性的影响

作者：贾贵清; 张明鸣; 杨平; 程惊秋; 陆燕蓉; 伍晓汀

来源：四川大学学报（医学版）, 2009, 40(04): 719-723.

• 间充质干细胞
• 细胞培养
• 细胞分离
• 骨髓
• 大鼠

目的探讨获得大量、高纯度、高活性骨髓间充质干细胞(BMSCs)的有效途径。方法用密度梯度离心法和贴壁法分离纯化BMSCs,在无血清、含小牛或胎牛血清以及不同体积分数的胎牛血清的培养基中培养,传代扩增,观察各组细胞形态、生长特性,测定生长曲线,免疫细胞化学染色鉴定表面抗原,电镜观察细胞显微结构。结果密度梯度离心法可获得较纯的原代细胞,但细胞增殖缓慢,容易老化;贴壁法分离的细胞生长增殖迅速,经传代换液,第4代细胞基本纯化;小牛和胎牛血清均能促进BMSCs生长增殖,但在体积分数为0.12的胎牛血清中集落形成率最高(46.50%);细胞表达CD44、CD90,而CD14、CD45阴性;电镜下BMSCs符合干细胞的一般特性。结论经多次换液、严格控制传代消化时间(2～3min)和酶浓度(2.5g/L),采用贴壁纯化法在含体积分数为0.12的胎牛血清L-DMEM培养液中培养可获得大量、高纯度、高活性的BMSCs。

• 单位
  四川大学华西医院