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摘要
数字化核酸分析技术具有不依赖标准品的绝对定量分析能力，因而有利于实现病原分子的快速诊断。现有的数字化核酸分析方法通常采用离线式分析，操作繁琐且耗时较长，难以满足医疗资源有限情况下的检测需求。本研究建立了一种集成式微流控液滴数字化等温扩增方法。采用的微流控芯片集成了序列液滴核酸提取、负压驱动液滴生成和液滴环介导等温扩增(LAMP)功能，可采用集成化方式在1.5 h内完成细菌核酸数字化分析。此微流控芯片对大肠埃希氏菌的核酸提取效率为93.68%±32.38%;使用注射器负压驱动可在4 min内生成约20000个液滴，液滴体积的相对标准偏差(RSD)小于10%;液滴数字化LAMP检测动态范围跨越4个数量级(2.36×10~4～1.71×10~7 CFU/mL)。利用本方法检测尿路感染临床标本(n=13)中的大肠埃希菌，与传统定量培养方法结果相比较，本方法的检测灵敏度和特异性均为100%(K_(appa)=1,p<0.01)。本方法具有操作简便、定量分析准确的优点，为病原体的现场快速检测提供了一种有力的工具。
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