β-arrestin 2抗基因RNA慢病毒表达载体的构建与鉴定

作者：卜慧莲; 温晓岩; 刘希江; 徐懋; 曹菲; 田学愎; 杨辉; 高峰; 田玉科

来源：华中科技大学学报(医学版), 2011, 40(01): 37-40+46.

DOI：10.3870/j.issn.1672-0741.2011.01.009

• 基因沉默
• 抗基因RNA
• 慢病毒
• β-arrestin2 gene silencing
• antigene RNAs
• lentivirus vector
• beta arrestin 2

目的构建携带β-arrestin 2抗基因RNA的慢病毒表达载体并对其进行鉴定。方法将线性化的慢病毒载体pGC-FU与抗基因RNA在In-Fusion交换酶作用下构建目的质粒pGC-agRNA,转化感受态细胞,对长出的克隆应用菌落PCR鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和比对分析。重组病毒质粒与另外两种辅助包装原件载体质粒通过LipofectamineTM2000共转染293T细胞,培养48 h后,收集细胞培养上清液,将病毒浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度,并检测慢病毒载体在工具细胞NG108-15细胞的转染效率。结果抗基因RNA被成功构建入慢病毒表达载体pGC-FU,病毒滴度为2×10...

• 单位
  北京大学第三医院; 山东省聊城市人民医院; 华中科技大学同济医学院附属同济医院