miR-144通过靶向MYCN对小儿神经母细胞瘤增殖凋亡及顺铂耐药的影响机制

作者：刘慧娟; 李桂玲; 雷平冲^*

来源：中华肿瘤杂志, 2019, 41(07).

• miR-144
• MYCN
• 小儿神经母细胞瘤
• 增殖
• 凋亡
• 耐药

目的探讨miR-144对神经母细胞瘤细胞增殖凋亡和顺铂耐药的影响及其机制。方法采用实时荧光定量PCR法检测神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y、SK-N-SH和人脐静脉内皮细胞HUVEC中miR-144、MYCN mRNA的表达。将miR-NC、miR-144 mimics、si-NC、si-MYCN、miR-144 mimics+pcDNA和miR-144 mimics+pcDNA-MYCN转染至SH-SY5Y细胞, 四甲基偶氮唑蓝法检测细胞的半数抑制率(IC50)和增殖情况, Western blot检测细胞中MYCN、p21、Cyclin D1、Bax和Bcl-2蛋白的表达, 流式细胞术检测细胞的凋亡, 双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果与人脐静脉内皮细胞HUVEC(1.01±0.03)比较, 神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y中miR-144的表达(0.32±0.03)降低, MYCN mRNA和蛋白的表达水平(分别为2.42±0.18和1.98±0.15)升高, 顺铂对SH-SY5Y细胞的IC50为9.16 μg/ml。miR-144组和miR-NC组SH-SY5Y细胞在490 nm波长处的吸光度值分别为0.30±0.03和0.46±0.03, 凋亡率分别为(26.94±2.01)%和(9.68±0.52)%。顺铂的IC50分别为2.95±0.26和9.23±0.61, 差异均有统计学意义(均P>0.05)。miR-NC组和miR-144组SH-SY5Y细胞中p21蛋白的表达水平分别为2.67±0.19和1.01±0.07, Cyclin D1蛋白的表达水平分别为0.41±0.04和1.00±0.06, Bax蛋白的表达水平分别为2.12±0.21和1.00±0.05, Bcl-2蛋白的表达水平分别为0.18±0.01和1.00±0.06, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。敲减原癌基因MYCN与过表达miR-144对SH-SY5Y细胞的作用类似。miR-144可明显抑制野生型MYCN细胞的荧光活性, 并负向调控MYCN的表达;过表达MYCN可逆转miR-144对SH-SY5Y细胞的增殖抑制, 促进凋亡及对顺铂的增敏作用。结论 miR-144可抑制神经母细胞瘤细胞的增殖, 促进凋亡, 增强对顺铂的敏感性, 其机制可能与靶向MYCN有关, 可为神经母细胞瘤的治疗提供依据。

• 单位
  河南省人民医院