胰岛素诱导基因-2启动子荧光素酶报告基因重组质粒的构建与鉴定

作者：杨发建; 张琴; 何芸; 周龙洋; 卜友泉; 孙文娟; 何百成; 杨俊霞

来源：中国生物制品学杂志, 2013, 26(04): 465-468.

DOI：10.13200/j.cjb.2013.04.30.yangfj.019

• 胰岛素诱导基因-2
• 启动子
• 荧光素酶
• 报告基因

目的构建胰岛素诱导基因-2(Insulin induced gene-2,Insig-2)启动子荧光素酶报告基因重组质粒,并检测其转录活性。方法从人基因组DNA中扩增Insig-2基因转录起始位点上游1 389 bp的启动子片段,插入pGL3-basic质粒中,构建重组质粒pGL3-Insig-2,将其与内参质粒pRL-TK瞬时共转染HEK293、HepG2和3T3-L1细胞,采用双荧光素酶法检测Insig-2启动子活性。结果重组质粒pGL3-Insig-2经双酶切和DNA测序,证实构建正确;pGL3-Insig-2质粒在HEK293、HepG2和3T3-L1细胞中均具有启动子活性,分别为阴性对照组(pGL3-basic空载体)的28、40和214倍、阳性对照组(pGL3-SV40)的2.6、5.5和30倍,呈现出强启动子活性。结论成功构建了Insig-2基因启动子荧光素酶报告基因重组质粒,为后续Insig-2基因的深入研究奠定了基础。

• 单位
  重庆医科大学