野生大豆GsPP2CA和GsPKA对GsSnRK1.1蛋白活性的调控

作者：刘圆明; 尤宏光; 卢浩然; 丁晓东^*

来源：西北植物学报, 2020, 40(08): 1277-1286.

• GsSnRK1.1
• 蛋白激酶
• 蛋白磷酸酶
• 磷酸化
• 酵母

为了明确GsSnRK1.1蛋白激酶在野生大豆生长发育中的具体调控机制,该研究利用酵母二元杂交技术发现了蛋白激酶GsSnRK1.1的互作蛋白GsPP2CA和GsPKA,利用原核表达系统对GsSnRK1.1、GsPP2CA和GsPKA进行了表达和纯化用于Pull-down和体外磷酸化分析,并在酵母中研究了GsPP2CA和GsPKA对GsSnRK1.1蛋白活性的调控功能。结果表明:(1)GsSnRK1.1与GsPP2CA和GsPKA具有物理互作关系,Phos-Tag和pPKDsub特异性磷酸化抗体检测发现,GsSnRK1.1的Thr176磷酸化可以被蛋白磷酸酶GsPP2CA去磷酸化,GsPKA可能会磷酸化GsSnRK1.1的其他潜在磷酸化位点,进而竞争性抑制GsSnRK1.1的Thr176位点的磷酸化水平。(2)将这些基因回补进入酵母ARY330(-snf1/-reg1/-sit4)突变株系中,发现共转化GsSnRK1.1和GsPP2CA或GsPKA的转化子可在非葡萄糖碳源和高葡萄糖碳源的选择培养基上正常生长,GsPP2CA、GsPKA可以替代Reg1和Sit4降低GsSnRK1.1过度磷酸化对酵母细胞产生的毒害作用,进而调控GsSnRK1.1对非发酵型碳源的利用。

• 单位
  生命科学学院; 东北农业大学